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银杏达莫对局灶性脑缺血大鼠神经保护作用的研究
全日爱商城   2019-12-11

 

  近年来研究证实银杏叶提取物(Ginkgobiloba extract,GbE)通过抗凋亡、清除自由基、抗氧化、改善微循环、调节血脂等作用,对缺血性脑血管疾病的防治起着显著的疗效?。本研究对脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡及相关基bcl—xl、Cas pase一9表达的影响进行研究,探讨银杏达莫发挥脑保护作用的机制。

 

  1 材料与方法

  1.1 材料实验对象为成年Wistar大鼠30只,由中国医科大学实验动物中心提供,体重250~280g。

  1.2 方法

  1.2.1 分组随机分为假手术组、模型组和银杏达莫组,每组10只。假手术组不造模,模型组和银杏达莫组。bcl—xl、Casoase一9(Ab一1)、即用型SABC免疫组化染色试剂盒、原位TUNEL细胞凋亡检测试剂盒由武汉博士德公司提供。银杏达莫(5mg,商品名:杏丁,贵州益佰制药有限公司生产,国药准字(H52020032)。

  1.2.2 大鼠MCAO模型制备采用Zea—longa线栓法制成大鼠右侧MCAO模型,闭塞2小时后撤出尼龙线实现再灌注,5min后模型组和银杏达莫组分别腹腔注射生理盐水1ml/kg和银杏达莫注射液1ml/kg。标本制备:各组中的l0只大鼠于再灌注24小时处死,4%多聚甲醛心脏灌流、取脑固定,常规脱水、透明、浸

  蜡、包埋。连续作厚6mm冠状石蜡切片。免疫组化法检测bcl—xl、Cas pase一9表达:按免疫组化染色试剂盒说明书操作(SABC法)。结果判定:在高倍镜(4oo×)下观察每个标本取4~5个非连续的脑片,显微图像分析系统采集图像,分析阳性细胞所占面积百分比。TUNEL法检测凋亡神经细胞阳性率:切片常规脱蜡,按原位TUNEL细胞凋亡检测试剂盒说明书操作。

  1.2.3 结果判定每个标本取两张切片,分别在高倍镜(400×)下随机选取额顶叶及纹状体区不重叠的l0个视野,每视野计数100个细胞,计数凋亡阳性细胞率=凋亡阳性细胞/计数细胞总数×100%。

  1.2.4 统计学分析采用SPSSIO.0分析软件对收集到的数据进行处理,计量指标用 ±8表示,用t检验进行组间显著性检测。

  2 结果

  2.1 免疫组化法检测bel—xl蛋白表达(阳性面积百分比%):24h模型组大鼠脑组织中阳性面积百分比(1.8697±0.2175)与假手术组(0.2953±0.0276)相比有显著差异(P<0.05),而银杏达莫组(2.5973±0.2346)又明显高于模型组(P <0.05)。

  2.2 免疫组化法检测Cas pase一9蛋白表达(阳性面积百分比%):24h模型组大鼠脑组织中阳性面积百分比(6.4859±0.5903)与假手术组(2.9634±0.2162)相比有显著差异(P <0.05),而银杏达莫组(3.9510±0.3689)又明显低于模型组(P <0.05)。

  2.3 原位末端凋亡TUNEL法检测凋亡神经细胞阳性率(%):24h模型组(0.4384±0.09807)和假手术组相比(0.1935±0.0076)凋亡神经细胞率明显增加(P <0.05),银杏达莫组(0.2819±0.0537)与模型组相比凋亡神经细胞率明显减少(P<0.05)。

  3 讨论

  银杏达莫可以延迟神经细胞死亡,抑制脑细胞的过氧化作用,在各种脑缺血模型中显示出对脑缺血有着非常好的保护作用。bel一2基因家族过度表达可抑制钙超载、氧自由基、谷氨酸等所致的神经细胞凋亡。bel—xl和bcl一2有7l%同源性,它可阻止bax插入线粒体外膜,从而抑制凋亡。从本实验的结果显示:bel—xl基因蛋白在假手术组大鼠大脑组织中极少表达,但在缺血再灌注后24h模型组则出现了表达,这是机体对抗凋亡的一种反应,银杏达莫组大鼠脑组织中其表达明显高于模型组,说明银杏达莫可能通过上调bcl—xl蛋白的表达从而对脑缺血再灌注所造成的损伤起到一定的保护作用。Cas pase一9可增加于损伤后的脑区内如海马皮质等,预先给予Cas pase合成抑制剂可保护神经元免受这些损伤,说明Cas pase一9确实在神经元损伤中起重要作用_3 J。本实验中可观察到银杏达莫组大鼠脑组织Cas pase一9蛋白的表达水平有所降低,证实了其对脑缺血再灌注的干预效果是通过下调Cas pase一9蛋白的表达而实现的。本研究结果表明,银杏达莫能有效的增加缺血再灌注24h后bc1一xl基因蛋白表达、减少Cas pase一9蛋白表达,抑制神经细胞凋亡,起到脑保护作用。

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