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大蒜油对胃癌细胞增殖的抑制作用
全日爱商城   2019-01-24

 

 

 

 

  大蒜在我国民间药用已有3000多年的历史。在《本草纲目》和《验方新编》中就有关于大蒜药用价值的记载[1]。大蒜的挥发性物质、大蒜汁、大蒜浸出液中均含有效成分大蒜辣素(alliinase),具有抗炎、抗癌作用,可抑制多种肿瘤细胞生长,并诱导肿瘤细胞凋亡[2]。目前,大蒜辣素的抗肿瘤作用机制还不太清楚。笔者结合以往研究中发现,转化生长因子α(TGF-α)能够促进胃癌SGC7901细胞增殖,探讨大蒜油对TGF-α促胃癌细胞增殖的影响。

  1 材料与方法

  1.1 主要试剂与配制

  1.1.1 大蒜油(又名大蒜注射液)的制备 由南方医院药局药剂科完成。用优质大蒜重蒸,获挥发油;加0.9%氯化钠调至含生药1g/ml的浓度,其中生物学活性物质主要为大蒜辣素。

  1.1.2 主要试剂 RPMI-1640为Gibco公司产品;小牛血清为杭州四季青公司产品,无支原体级;胰蛋白酶为美国Sigma公司产品;四唑盐(MTT)为美国Sigma公司产品,其工作液用PBS(0.01mol/L,pH7.4)配制,浓度为2g/L;二甲亚砜(DMSO)为国内产品;TGF-α为美国Sigma公司产品。

  1.2 方法

  1.2.1 大蒜油对胃癌细胞增殖的影响 胃腺癌SGC7901细胞用含10%小牛血清RPMI-1640完全培养液、置5%CO2培养箱、37℃常规培养。用胰酶消化后收集细胞,进行细胞计数后传代。以3×104/ml细胞数传代于96孔培养板,200μl/孔,24h后处理细胞。分别给予以下4种处理,每种处理均设5个复孔。A处理:细胞常规培养,用作对照B~D处理:分别为A处理加5%、10%、15%大蒜油;均作用72h。用倒置显微镜观察细胞生长情况,用MTT比色法检测细胞增殖。

  1.2.2 大蒜油对TGF-α刺激的胃癌细胞增殖的影响 细胞以2.5×104/ml传代于96孔培养板,200μl/孔;24h后给予2.5%低浓度血清培养,以便于观察外源性TGF-α的促增殖作用。分别给予下述4种处理,每种处理均设5个复孔。A处理:给予2.5%低血清培养,用作对照;B处理:A处理加30μg/LTGF-α;C处理:A处理加2.5%大蒜油;D处理:A处理加30μg/LTGF-α和2.5%大蒜油;均作用72h。用倒置显微镜观察细胞生长情况,用MTT比色法检测细胞增殖。

  1.2.3 细胞增殖的MTT比色法检测 细胞经上述处理后,吸去培养液,加MTT工作液50μl/孔;置5%CO2培养箱、37℃孵育4h;吸去MTT液,加DMSO150μl/孔,振荡10min,使紫红色结晶物充分溶解;用酶联免疫检测仪MeterTechS960,日本生产)测定490nm波长处各孔的光吸收值(OD值。

  1.3 统计学处理方法

  用SPSS10.0统计软件分析各种处理OD值的差异,计量资料用t检验。根据以下公式计算细胞生长抑制率:抑制率=(1-实验组OD)/对照组OD×100%。

  2 结果

  2.1 大蒜油对胃癌细胞增殖的抑制作用细胞经大蒜油处理后,用倒置显微镜观察,见细胞生长密度降低。MTT比色法检测显示,胃癌细胞增殖受到抑制,并随大蒜油浓度的增加而增强。酶联免疫检测仪检。

  2.2 大蒜油对TGF-α刺激的胃癌细胞增殖不同处理的抑制作用

  细胞经上述处理后,用倒置显微镜观察,见加入30μg/LTGF-α处理后细胞生长密度增加;同时加入30μg/LTGF-α和2.5%大蒜油,与单加TGF-α比较,细胞生长密度有所降低。用MTT比色法检测的光吸收。

  上述结果显示:给予2.5%低浓度大蒜油处理时,与低血清培养的对照组比较,胃癌细胞增殖速度无明显变化;给予30μg/LTGF-α处理时,细胞增殖明显加快;当同时给予2.5%大蒜油和30μg/LTGF-α时,则TGF-α的促增殖作用受到抑制(P<0.01),根据公式计算,其抑制率为18.1%。

  3 讨论

  大蒜为百合科葱属植物,取其鳞茎作药用[1]。味辛辣,有浓烈的蒜味。大蒜中的有效成分为大蒜辣素[2],具有抗多种致病性细菌、真菌、原虫、病毒的作用,以及防癌、抑癌作用。丁建华等[3]在胃癌、食管癌低发区进行了配对病例研究,发现每天或经常进食新鲜蔬菜和大蒜,能降低患上消化道癌的危险。孙喜文等[4]在哈尔滨市也进行了配对病例研究,采用Logistic回归等方法分析,结果显示,经常食用大蒜、醋类和豆制品可明显降低患胃癌的危险性(降低50%以上)。

  大蒜辣素可抑制肝癌、肠癌、淋巴细胞性白血病等细胞的生长,导致细胞周期停滞,并可诱导细胞凋亡[2,5]。Miron等[6]和Arditti等[7]把大蒜辣素与CD20+单抗rituximab共轭在一起,其对CD20+的慢性淋巴细胞性白血病和B细胞性淋巴瘤具有靶向性,并以诱导细胞凋亡的方式杀死肿瘤细胞。大蒜油是对大蒜进行重蒸获得的挥发油,有效成分为大蒜辣素。研究发现,大蒜油能抑制常规培养下的胃癌细胞生长,并能抑制TGF-α刺激的胃癌细胞增殖。在以往研究中[8,9]笔者发现TGF-α可促进胃癌细胞DNA合成、cyclinE和D1的表达,加速胃癌细胞周期进程。已知胃癌细胞存在TGF-α自分泌、旁分泌促增殖环路[10]。结合研究结果,提示大蒜油可能对胃癌细胞TGF-α自分泌、旁分泌促增殖环路具有抑制作用。这可能是大蒜油抗肿瘤细胞增殖的作用方式之一。

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